оборудование для разведения перепелов
Вся правда о декоративном хромировании.

Перепелка

Перепёлка.org.ua

О ферме ~ Купить перепёлок, яйцо, клетку ~ Разведение ~ Инкубаторий ~ Бизнес ~ Мастерская ~ Поиск по сайту

Поиск по сайту


Методические подходы к определению видовой специфичности мясной продукции


ДНК перепелаИдентификация ДНК животного происхождения необходима для выявления фальсификации мясной продукции. Разработка методов контроля безопасности и качества мясной продукции включает унификацию и апробацию методов, позволяющих идентифицировать ее видовую специфичность.

В качестве быстрого и достоверного метода видового определения мясной продукции предложена ПЦР, позволяющая получать воспроизводимые результаты высокой степени точности. Принцип метода состоит в многократном увеличении концентрации специфичного для данного вида животного участка ДНК с помощью специально подобранной пары праймеров. В качестве матрицы для реакции используют фрагменты генов митохондриальной или ядерной ДНК, являющиеся, как правило, строго специфичными для каждого вида животного: 12S рРНК, Д-петля, 16S рРНК, цитохром Б, тРНК Вал. По сравнению с альтернативными аналитическими методами, основанными, например, на идентификации белка, ПЦР имеет существенное преимущество: молекула ДНК является достаточно стабильной и это позволяет проводить достоверное определение даже в продуктах, подвергшихся существенной термической обработке.

Методом ПЦР с использованием видоспецифичной пары праймеров на перепела нами было определено наличие или отсутствие перепелиных яиц в 12 образцах майонезов. Предварительно пара праймеров была проверена на возможность возникновения перекрестной реакции с пятью различными стандартами ДНК животного происхождения: курица, перепел, утка, индейка, говядина. Праймеры на перепела показали достоверную видоспецифичность.

Для идентификации был применен метод Nested ПЦР, который позволяет повысить чувствительность реакции и избежать появления нежелательных побочных продуктов. Метод основан на последовательном применении двух пар праймеров - внешней и внутренней. После проведения первого раунда продуктом амплификации является достаточно большой фрагмент гена 12S рРНК, составляющий 720 пар нуклеотидов, присутствующий в митохондриальном геноме следующих видов птиц: перепел, фазан, куропатка, цесарка, глухарь, вальдшнеп, вяхирь, певчий дрозд, курица, индейка, гусь, мускусная утка.

Для следующего этапа идентификации использовалась вторая пара праймеров, видоспецифичная на перепела, которая комплементарно связывалась с внутренним фрагментом ампликона, полученного после первого раунда ПЦР. Результатом амплификации являлась нуклеотидная последовательность в 129 пар азотистых оснований, регистрируемая методом горизонтального электрофореза.

Дополнительно в качестве внутреннего контроля была использована еще одна пара праймеров, комплементарно связывающаяся с фрагментом гена, кодирующего 18S рРНК, длиною 89 пар нуклеотидов. Этот ген является общим для млекопитающих и птиц. Таким образом, во втором раунде проводили дюплексную ПЦР: одновременно в реакционную смесь вводили праймеры внутреннего контроля и видоспецифичные для перепела. Одновременное присутствие в ультрафиолетовом свете 2 полос свечения на уровне 129 и 89 пар нуклеотидов позволяло достоверно утверждать о наличии в составе майонеза перепелиного яйца.

Наряду с классическим вариантом ПЦР для определения видовой специфичности используется метод «SureFood® Animal-ID», представляющий собой комплекс PCR-ELISE и иммуноферментной детекции. Коммерческие наборы с помощью видоспецифичных зондов позволяют определить наличие в образце ДНК следующих животных: коровы, козы, свиньи, овцы, оленя, курицы, гуся, индейки и утки. Методом «SureFood® Animal-ID» были проведены исследования 17 образцов мясной продукции, содержащей в своем составе свинину, курицу, баранину, индейку, говядину, утку, среди которых 9 являлись многокомпонентными продуктами: сырокопченые и вареные колбасы, мясные нарезки, сосиски, а также брынза. Результаты выявили высокую чувствительность метода (предел обнаружения составил не менее 1%) и высокую специфичность зондов, которая дает возможность достоверной идентификации ДНК нескольких видов животных в многокомпонентных образцах, прошедших глубокую термическую обработку.

В дальнейшем в рамках данной работы планируется разработать, унифицировать и апробировать методы контроля мясной продукции, основанные на видовом определении ДНК животного происхождения.

Устинова Ю.В., Песчаницкая Е.В.
Московский государственный университет пищевых производств


Перепелиные яйца




Статья была Вам интересна? Подпишитесь на рассылку “Перепёлка.org.ua - новости перепеловодства” и Вы всегда будете в курсе инноваций в мире перепелов. Подписаться >>



Вы можете высказать своё мнение по данному материалу или задать вопрос. Администратор сайта ежедневно просматривает комментарии и отвечает на вопросы.


Данную страницу никто не комментировал. Вы можете стать первым.

Ваше имя:
Ваша почта:

Комментарий:
Введите символы: *
captcha
Обновить